根據分離機制的不同，液相色譜法可分為下述幾種主要類(lèi)型：1 。液 — 液分配色譜法Liquid-liquid Partition Chromatography及化學(xué)鍵合相色譜Chemically Bonded Phase Chromatography流動(dòng)相和固定相都是液體。流動(dòng)相與固定相之間應互不相溶(極性不同，避免固定液流失)，有一個(gè)明顯的分界面。當試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達到平衡時(shí)，服從于下式：
式中，cs—溶質(zhì)在固定相中濃度;cm--溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度; Vs—固定相的體積;Vm—流動(dòng)相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K，K大的組分保留值大;但也有不同之處，GPC中，流動(dòng)相對K影響不大，LLPC流動(dòng)相對K影響較大。
a. 正相液 — 液分配色譜法Normal Phase liquid Chromatography: 流動(dòng)相的極性小于固定液的極性。
b. 反相液 — 液分配色譜法Reverse Phase liquid Chromatography: 流動(dòng)相的極性大于固定液的極性。
c. 液 — 液分配色譜法的缺點(diǎn)：盡管流動(dòng)相與固定相的極性要求*不同，但固定液在流動(dòng)相中仍有微量溶解;流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí)的機械沖擊力，會(huì )造成固定液流失。上世紀70年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相(見(jiàn)后)，可克服上述缺點(diǎn)?，F在應用很廣泛(70~80%)。
液 — 固色譜法流動(dòng)相為液體，固定相為吸附劑(如硅膠、氧化鋁等)。這是根據物質(zhì)吸附作用的不同來(lái)進(jìn)行分離的。其作用機制是：當試樣進(jìn)入色譜柱時(shí)，溶質(zhì)分子 X 和溶劑分子S對吸附劑表面活性中心發(fā)生競爭吸附(未進(jìn)樣時(shí)，所有的吸附劑活性中心吸附的是S)，可表示如下：Xm nSa ====== Xa nSm式中：Xm--流動(dòng)相中的溶質(zhì)分子;Sa--固定相中的溶劑分子;Xa--固定相中的溶質(zhì)分子;Sm--流動(dòng)相中的溶劑分子。
當吸附競爭反應達平衡時(shí)：K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]式中：K為吸附平衡常數。[討論：K越大，保留值越大。]3 。離子交換色譜法Ion-exchange ChromatographyIEC是以離子交換劑作為固定相。IEC是基于離子交換樹(shù)脂上可電離的離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子進(jìn)行可逆交換，依據這些離子以交換劑具有不同的親和力而將它們分離。
以陰離子交換劑為例，其交換過(guò)程可表示如下：X-溶劑中 樹(shù)脂-R4N Cl-=== 樹(shù)脂-R4N X- Cl- 溶劑中當交換達平衡時(shí)：KX=[-R4N X-][ Cl-]/[-R4N Cl-][ X-]分配系數為：DX=[-R4N X-]/[X-]= KX [-R4N Cl-]/[Cl-][討論：DX與保留值的關(guān)系]凡是在溶劑中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法來(lái)進(jìn)行分離。
4 。離子對色譜法Ion Pair Chromatography離子對色譜法是將一種 或多種 與溶質(zhì)分子電荷相反的離子 稱(chēng)為對離子或反離子 加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結合形成疏水型離子對化合物，從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。其原理可用下式表示：X 水相 Y-水相 === X Y-有機相式中：X 水相--流動(dòng)相中待分離的有機離子(也可是陽(yáng)離子);Y-水相--流動(dòng)相中帶相反電荷的離子對(如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基*銨等);X Y---形成的離子對化合物。
當達平衡時(shí)：KXY = [X Y-]有機相/[ X ]水相[Y-]水相根據定義，分配系數為：DX= [X Y-]有機相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相[討論：DX與保留值的關(guān)系]離子對色譜法特別是反相發(fā)解決了以往難以分離的混合物的分離問(wèn)題，諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。
5 。離子色譜法Ion Chromatography用離子交換樹(shù)脂為固定相，電解質(zhì)溶液為流動(dòng)相。以電導檢測器為通用檢測器，為消除流動(dòng)相中強電解質(zhì)背景離子對電導檢測器的干擾，設置了抑制柱。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應原理與離子交換色譜法相同。
以陰離子交換樹(shù)脂(R-OH)作固定相，分離陰離子(如Br-)為例。當待測陰離子Br-隨流動(dòng)相(NaOH)進(jìn)入色譜柱時(shí)，發(fā)生如下交換反應(洗脫反應為交換反應的逆過(guò)程)：
抑制柱上發(fā)生的反應：R-H Na OH- === R-Na H2OR-H Na Br- === R-Na H Br-可見(jiàn)，通過(guò)抑制柱將洗脫液轉變成了電導值很小的水，消除了本底電導的影響;試樣陰離子Br-則被轉化成了相應的酸H Br-，可用電導法靈敏的檢測。
6 ?？臻g排阻色譜法Steric Exclusion Chromatography空間排阻色譜法以凝膠 gel 為固定相。它類(lèi)似于分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數納米到數百納米。溶質(zhì)在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來(lái)進(jìn)行分離，而是按分子大小進(jìn)行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流動(dòng)力學(xué)體積或分子大小有關(guān)。試樣進(jìn)入色譜柱后，隨流動(dòng)相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過(guò)。在試樣中一些太大的分子不能進(jìn)入膠孔而受到排阻，因此就直接通過(guò)柱子，首先在色譜圖上出現，一些很小的分子可以進(jìn)入所有膠孔并滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保留值大，在色譜圖上后出現。
